传染性造血器官坏死病毒糖蛋白抗血清的制备及应用

• 作者: 兰文升 刘荭 朱旭 杜鹃 陈孝煊 高隆英
• 来源期刊: 渔业科学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 传染性造血器官坏死症病毒 糖蛋白 原核表达 抗血清
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 112-117
• 页数: 6页
• 分类号: S941.41
• 字数: 4995字
• 语种: 中文

摘要

应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)从传染性造血器官坏死病毒(Infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)感染的细胞悬液克隆病毒的糖蛋白基因,将其亚克隆至原核表达载体pCWori,转化到大肠杆菌DH 5α,通过发酵大肠杆菌制备病毒糖蛋白.经SDS-PAGE分析,诱导表达的重组蛋白主要以包涵体的形式存在,使用Ni-NTA亲和层析柱在变性条件下进行纯化并透析复性,最终得到了较高纯度的可溶性糖蛋白,分子量约为57 kDa.Western-blot分析结果显示,所表达的蛋白能够被IHNV病毒制备的兔抗IHNV血清识别.用复性后的蛋白免疫小鼠制备抗血清,ELISA显示抗体效价可达1∶64 000.经制备的抗血清可以作为一抗建立ELISA检测方法,用于检测细胞悬液的病毒粒子,将抗血清稀释到1∶16 000仍能与IHNV全病毒发生反应.本研究利用重组的IHNV糖蛋白成功制备了高效价的抗血清,并能够与IHNV全病毒发生特异性结合,为IHNV免疫学检测方法建立奠定了基础.