大鼠SOCS3基因重组腺病毒载体的构建及转染血管平滑肌细胞后的表达

• 作者: 刘金平 史嘉玮 向水 王玉 肖雅琼 董念国
• 来源期刊: 华中科技大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: SOCS3 腺病毒载体 转基因治疗 血管平滑肌细胞 血管增殖性疾病
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 556-561
• 页数: 6页
• 分类号: R349.8
• 字数: 5417字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-0741.2012.05.011

摘要

目的 构建携带大鼠SOCS3基因的重组腺病毒载体并转染大鼠血管平滑肌细胞,评价其转染效果,为血管增殖性疾病转基因治疗的实验研究奠定基础.方法 用BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ将目的基因pUC57-Simple-rSOCS3及腺病毒穿梭载体pYr-adshuttle- 4(带GFP标记)行双酶切.回收酶切质粒的目的片段进行连接,产物转化至DH5α感受态.提取质粒酶切鉴定正确后测序.通过LR体外同源重组将rSOCS3表达框构建至pAd/PL-DEST腺病毒表达载体上.将腺病毒线性化后转染HEK293细胞包装腺病毒,PCR鉴定此腺病毒中是否含有rSOCS3基因.放大培养并收集病毒,TCD法测定病毒滴度.将此病毒感染大鼠血管平滑肌细胞,荧光显微镜观察感染效率,real-time PCR及免疫印迹检测SOCS3 mRNA及蛋白表达.结果 rSOCS3腺病毒穿梭质粒酶切鉴定正确,测序与rSOCS3基因库中的序列完全相符.PCR鉴定pAd/PL-DEST腺病毒表达载体成功携带目的基因rSOCS3.TCD法测定的最终滴度为2×1010pfu/mL.荧光显微镜观察此病毒感染血管平滑肌细胞的效率在80％以上,real-time PCR及免疫印迹检测结果显示血管平滑肌细胞中SOCS3 mRNA及蛋白表达明显上调.结论 成功构建携带大鼠SOCS3基因的腺病毒载体,并在血管平滑肌细胞中高表达,为血管增殖性疾病转基因治疗的实验研究奠定了基础,具有一定的应用价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	董念国	华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科	221	659	11.0	13.0
2	刘金平	华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科	55	198	8.0	11.0
3	史嘉玮	华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科	92	313	10.0	12.0
4	肖雅琼	华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科	27	99	6.0	8.0
5	王玉	华中科技大学同济医学院基础医学院生物化学与分子生物学系	32	133	7.0	9.0
6	向水	华中科技大学同济医学院附属协和医院心血管外科	5	26	2.0	5.0