人LC3蛋白在大肠杆菌中的表达纯化及其抗体的制备与鉴定

• 作者: 李艳君 李骅 潘欢 胡嘉 陈英玉
• 来源期刊: 细胞与分子免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞自噬 LC3 抗体 原核表达
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 517-519,523
• 分类号: Q78|R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的:制备兔抗人LC3的多克隆抗体,为细胞自噬的研究提供有用的检测工具.方法:构建pET32a(+)LC3的原核细胞表达载体并进行序列鉴定,大肠杆菌BL21( DE3)中诱导表达LC3蛋白,SP-Sepharose XL柱纯化；纯化的人LC3蛋白免疫兔制备抗血清,通过LC3蛋白偶联的Sepharose 4B(LC3-Sepharose 4B)亲和层析纯化兔抗人LC3的多克隆抗体,以间接ELISA和Western blot鉴定其特异性.结果:成功实现了LC3蛋白在大肠杆菌中的高效表达和纯化,并用质谱分析证明表达蛋白相对分子质量(M1)为15 500.制备的兔抗人LC3多克隆抗体具有很高的特异性,与大肠杆菌成分无交叉反应.Western blot能够特异检测自噬过程中LC3 Ⅰ型和Ⅱ型蛋白,观察到自噬发生时LC3 Ⅰ向LC3Ⅱ的转化.结论:获得了重组人LC3蛋白,成功地制备了该分子的特异性多克隆抗体,为细胞自噬的检测提供了有用的探针.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李艳君	卫生部医学免疫学重点实验室北京大学基础医学院	2	2	1.0	1.0
3	胡嘉	卫生部医学免疫学重点实验室北京大学基础医学院	3	2	1.0	1.0
5	潘欢	北京大学人类疾病基因研究中心	5	26	3.0	5.0
6	李骅	卫生部医学免疫学重点实验室北京大学基础医学院	1	2	1.0	1.0