串联亲和纯化技术筛选肠病毒71型3D聚合酶的相互作用蛋白

• 作者: 丛浩龙 李梨 江月 王健
• 来源期刊: 第三军医大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 肠道病毒71型 3D聚合酶 串联亲和纯化 液相色谱-质谱分析法
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 526-529
• 分类号: R373.2|R394-33|R394.3
• 语种: 中文

摘要

目的 利用串联亲和纯化技术筛选与肠病毒71型3D聚合酶相互作用的宿主细胞蛋白.方法 利用RT-PCR方法从EV71BrCr株全基因组中获得3D聚合酶全长基因,构建pcDNA3.0-3D-Flag-HA真核表达载体并转染RD细胞,48 h后收集细胞.用Western blot方法检测3D蛋白在RD细胞内的表达情况.串联亲和纯化技术筛选与3D聚合酶相互作用的宿主蛋白并进行质谱分析,确定与3D聚合酶相互作用的蛋白或多肽.并采用免疫共沉淀实验,对候选蛋白CyclinG1与3D的相互作用进行验证.结果 成功构建了pcDNA3.0-3D-Flag-HA载体,在RD细胞内检测到3D蛋白的表达.经串联亲和纯化和质谱分析得到LATS2、Nek2、APC5、CyclinG1、PI3K等一系列参与细胞凋亡及细胞周期调控的蛋白.免疫共沉淀实验证实3D蛋白与CyclinG1的相互作用.结论 3D聚合酶可能与宿主细胞内蛋白相互作用,引起细胞凋亡及细胞周期改变.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王健	中国科学院微生物研究所	153	1133	18.0	27.0
2	李梨	重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室	22	311	7.0	17.0
3	丛浩龙	中国科学院微生物研究所	3	7	1.0	2.0