口蹄疫病毒3D聚合酶多克隆抗体的制备与特性分析

• 作者: 刘力宽 吕建亮 张中旺 张昱 张永光 张淑刚 方玉珍 李正丰 杜进鑫 潘丽 王永录 蒋守田
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 口蹄疫病毒 3D聚合酶 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 6-9
• 页数: 4页
• 分类号: S852.65
• 字数: 2986字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2010.01.002

摘要

目的 表达口蹄疫病毒3D聚合酶,并制备兔抗3D多克隆抗体.方法 采用PCR方法扩增口蹄疫病毒(FMDV)3D聚合酶基因,经BamHⅠ和NdeⅠ双酶切后插入pET-30a(+)原核表达载体,构建的pET-3D重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定目的蛋白的表达并提取包涵体,纯化目的蛋白.然后用纯化蛋白免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体,以Western blot鉴定抗体特异性,并以间接ELISA方法测定其效价.结果 SDS-PAGE电泳分析显示,表达的目的蛋白约为46ku,与预期结果相符,制备的多克隆抗体效价达1:8000以上,且具有较高的特异性.结论 制备了具有高亲和性和特异性的3D聚合酶多克隆抗体,为3D聚合酶的生物学功能和抗原表位研究奠定了基础.