A型口蹄疫病毒型特异性抗原的可溶性原核表达及多克隆抗体的制备

• 作者: 丛国正 常惠芸 林彤 独军政 邵军军 高闪电
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: A型口蹄疫病毒 结构蛋白VP1 原核表达 可溶性 OmpT信号肽
• 年，卷（期）: 2010,（9）
• 页码范围: 821-824
• 分类号: R392.11
• 字数: 2820字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2010.09.007

摘要

目的 可溶性表达A型口蹄疫病毒型特异性结构蛋白VP1,制备型特异性的兔抗A型FMDV VP1多克隆抗体.方法 以A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因重组克隆载体pGEM-AVP1为模板,设计表达引物,经PCR扩增获得上游带有OmpT信号肽编码序列的VP1基因编码区,将其克隆至该表达载体pET-30a(+)中,构建可溶性原核表达载体pET-30a-OmpT-AVP1.将该重组质粒转化大肠杆菌工程菌株BL21-(DE3)-plysS,经IPTG诱导表达,以金属离子螯合层析法对可溶性表达的VP1融合蛋白进行纯化,然后用纯化的蛋白免疫新西兰大耳白兔制备其多克隆抗体,以ELISA、Western blot和间接免疫荧光法分别对多克隆抗体进行鉴定.结果 SDS-PAGE电泳分析显示pET-30a-OmpT-AVP1重组菌经诱导后表达一Mr 约为33 000的VP1融合蛋白,与预期结果相符.目的蛋白纯化后,在电泳图片上显示较为清晰的单一条带.Western blot 分析结果显示,VP1蛋白可与豚鼠抗A型口蹄疫病毒阳性血清反应.用纯化VP1蛋白免疫新西兰大耳白兔制备的多克隆抗体效价达1∶12 800以上,具有较高的型特异性,并且可与同型FMDV细胞培养物中的病毒抗原发生反应.结论 制备了具有高亲和性和特异性的兔抗A型FMDV结构蛋白VP1多克隆抗体,为A型FMDV易感动物的抗体筛查及病原鉴定奠定了基础.