口蹄疫病毒RNA聚合酶3D基因在毕赤酵母中的表达

• 作者: 刘在新 张腾国 谢庆阁
• 来源期刊: 中国兽医科技
• 学科: 农学
• 关键词: FMDV 3D基因 基因克隆 毕赤酵母表达系统
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 8-11
• 页数: 4页
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 3484字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4696.2004.01.002

摘要

以口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)RNA聚合酶基因3D为研究对象,对其部分碱基进行定点诱变,替换成在毕赤酵母(Pichia pastoris)中使用频率较高的密码子以优化其表达.改造后的目的片段用NotⅠ和AvrⅡ内切酶双酶切,然后与相应内切酶双酶切的穿梭载体pPIC9K相连接,构建重组表达载体pPIC9K/3D,转化大肠埃希氏菌JM109,筛选阳性克隆pPIC9K/3D.经测序表明,插入位置、突变碱基、片段大小和读码框均正确.重组质粒用SacⅠ内切酶线化,电转化毕赤酵母SMD1168,采用G418抗性梯度法筛选,获得高拷贝整合重组菌株SMD1168/pPIC9K/3DHIS+MUT+,利用甲醇进行诱导分泌表达,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定,3D基因在毕赤酵母中表达成功,目的蛋白分子质量大小为52 ku,与预期的大小吻合,并能够被FMDV阳性血清所识别,表达量占总分泌蛋白量的36%.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谢庆阁	中国农业科学院兰州兽医研究所	62	755	16.0	24.0
2	刘在新	中国农业科学院兰州兽医研究所	47	488	11.0	21.0
3	张腾国	兰州大学生命科学学院	3	41	3.0	3.0