鼠肝炎冠状病毒非结构蛋白1及其突变体的原核表达

• 作者: 何湘 刘景梅 吴晓燕 孙走南 常国辉 杨益 林磊 柳洪涛 祝庆余 罗彦军 苏文莉
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 鼠肝炎冠状病毒 非结构蛋白1 突变体 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 471-475
• 分类号: Q78
• 字数: 4795字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2012.04.001

摘要

目的:构建鼠肝炎冠状病毒(MHV)非结构蛋白1(NSP1)及其突变体(NSP1 mu)的原核重组表达质粒,在大肠杆菌中分别融合表达重组NSP1及NSP1 mu.方法:以现有质粒载体为模板,扩增编码NSP1及NSP1 mu的基因片段,并克隆至pMD18-T克隆载体；菌落PCR鉴定阳性克隆并测序分析；将阳性克隆的目的片段亚克隆至表达载体pET-28a,并转化大肠杆菌TOP10感受态细胞,PCR和双酶切鉴定转化菌落；将阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并加入IPTG诱导表达,SDS-PAGE和免疫印迹分析目的蛋白的表达.结果:PCR扩增得到表达NSP1及NSP1 mu的特异片段,并克隆到pMD18-T载体,测序结果正确无误；构建了NSP1和NSP1 mu的重组表达质粒,并在大肠杆菌BL21(DE3)中分别融合表达了重组NSP1及NSP1 mu,表达的目的蛋白均能与His单克隆抗体特异结合；用Ni-NTA琼脂糖试剂盒纯化重组蛋白,获得可溶性的NSP1及NSP1 mu,相对分子质量分别为27×103和28×103.结论:在大肠杆菌中分别表达并纯化获得了大量可溶性重组NSP1及NSP1 mu.