人FGFR1的BacMam系统构建、表达、纯化与鉴定

• 作者: 孟俊炜 方成 武艺 罗志勇 陈艳霞
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: BacMam 载体构建 蛋白表达 激酶活性
• 年，卷（期）: 2012,（10）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 114-118
• 页数: 5页
• 字数: 3430字
• 语种: 中文

摘要

目前激酶类蛋白的表达大多由昆虫细胞表达系统实现,采用BacMam系统来表达受体型酪氨酸激酶人FGFR1,旨在获得更接近天然结构与功能的重组蛋白.首先,将pDEST20载体的多角体蛋白启动子替换成CMV enhancer启动子,获得BacMam表达载体pDEST20-CMVe.通过Gateway系统,将FGFR1具有酪氨酸激酶活性的区域克隆至改造后的载体中.利用昆虫细胞Sf9产生病毒,P2代病毒转导哺乳动物细胞FreeStyle 293-F进行表达,经亲和纯化后,成功获得了75 kD的融合蛋白.通过磷酸化底物的反应检测此FGFR1激酶的活性.结果表明,BacMam系统是一个良好的表达重组激酶FGFR1的平台,并且所表达的激酶活性高于昆虫细胞表达的激酶蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	武艺	同济大学生命科学与技术学院	1	0	0.0	0.0
5	罗志勇		1	0	0.0	0.0
6	陈艳霞		1	0	0.0	0.0
7	孟俊炜		1	0	0.0	0.0
8	方成		1	0	0.0	0.0