人CD14信号肽介导卵清蛋白在HEK293T细胞的高效表达

• 作者: 仲飞 张峰 张考 李振 李秀锦 能昌爱 陈慧慧 韩冬梅
• 来源期刊: 动物营养学报
• 学科: 农学
• 关键词: 卵清蛋白 人CD14信号肽 重组蛋白表达 HEK293T细胞
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 分子营养
• 页码范围: 2165-2171
• 页数: 7页
• 分类号: S852.2
• 字数: 4959字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-267x.2012.11.014

摘要

本试验将人CD14信号肽序列与卵清蛋白(ovalbumin,OVA)基因融合,旨在提高OVA在非输卵管上皮细胞中的表达.提取鸡输卵管上皮细胞总RNA,经反转录合成的cDNA,再利用修饰的特异性引物,通过PCR从cDNA中分别扩增出5′端与人CD14信号肽序列融合和非融合的OVA基因,并将它们分别插入到真核表达载体pcDNA3.1A中,构建成表达载体pcDNA-CD14sp-OVA和pcDNA-OVA.经磷酸钙介导,将质粒转染至HEK293T细胞,使其进行表达,用鼠抗OVA单克隆抗体通过免疫印迹(Western blot)法检测OVA表达水平.结果表明:本试验扩增的OVA基因序列与GenBank中的序列(登录号NM_205152)一致,构建的人CD14信号肽序列融合OVA基因的表达载体结构正确.经过在HEK293T细胞的表达,融合人CD14信号肽序列的重组蛋白OVA的表达水平明显得到提高.结果提示,融合人CD14信号肽序列后的重组蛋白OVA在非输卵管上皮细胞中的表达水平明显提高,为OVA基因作为DNA疫苗模式抗原的应用提供了必要的条件.