人促甲状腺激素受体HEK293T细胞稳定表达株的构建

• 作者: 唐恭顺
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 关键词: 人促甲状腺激素受体 慢病毒 HEK 293细胞 Graves甲亢
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 10-14
• 语种: 中文

摘要

目的 构建人促甲状腺激素受体(hTSHR)稳定表达株,用于研究抗甲状腺新药.方法 AgeⅠ/NheⅠ双酶切载体GV266和hTSHR基因,T4连接酶连接构建GV266-hTSHR表达质粒.转染GV266-hTSHR到293T细胞后,Western blot证明hTSHR表达.用Opti-MEM、Lipofectamine 2000、辅助质粒在293T细胞构建GV266包装质粒.qPCR测定包装病毒滴度.用GV266包装质粒、GV266-hTSHR表达质粒共转染293T细胞获得GV266-hTSHR-293T稳定表达株.绿色荧光蛋白(GFP)荧光鉴定稳定表达株.结果 GV266-hTSHR构建物阳性大肠杆菌克隆的DNA测序结果与hTSHR序列比对100％吻合.Western blot显示,过表达hTSHR的HEK293T细胞出现相对分子质量为62×103的目的条带.qPCR测定包装质粒滴度达到了2×108TU/mL.GV266-hTSHR-293T细胞稳定表达株表达GFP荧光.结论 构建了GV266-hTSHR表达质粒,获得了GV266-h TS HRHEK 293T稳定表达株,为研究抗甲状腺多肽提供了必要的实验材料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	唐恭顺	四川大学华西医院核医学科	18	67	5.0	7.0