人源性抗体在HEK293T细胞中瞬时表达条件的优化

• 作者: 向军俭 王宏 邓宁 陶俊 龚义平
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 医学
• 关键词: 人源性抗体 瞬时表达 优化 HEK293T
• 年，卷（期）: 2010,（11）
• 页码范围: 137-141
• 分类号: R3
• 字数: 4300字
• 语种: 中文

摘要

以HEK293T细胞为宿主对抗体基因的转染和表达条件进行优化.以GFP(green fluorescence protein)和人源性抗b FGF抗体1A2为报告基因,考察了3种转染试剂磷酸钙,PEI,FuGene HD的转染效率,确定FuGene HD的转染效率最高后,对DNA∶ FuGene HD的比例,加入氯喹的浓度,转染后的孵育时间,最佳的低温培养温度以及加入组蛋白抑制剂的浓度进行了优化.结果显示,FuGene HD的转染效率最高,达到56.7%.当转染的DNA= 2 μg /4×106 细胞时,DNA∶ FuGene HD的最佳比例为1∶ 4(W/V);加入氯喹能够增强FuGene HD的转染效率,最佳浓度为100 μmol/L,转染后的最佳孵育时间为6 h;低温诱导能够提高293T细胞表达抗体的能力,最佳的温度为33℃;加入组蛋白抑制剂丁酸钠或丙戊酸能够明显提高抗体的表达量,丙戊酸的效果优于丁酸钠.通过对转染试剂,转染方法,培养温度,组蛋白抑制剂的加入等条件进行优化使人源性抗bFGF抗体的表达量从1.5 mg/L提高到了15.1 mg/L.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王宏	暨南大学生命科学技术学院抗体工程中心	52	320	11.0	16.0
2	向军俭	暨南大学生命科学技术学院抗体工程中心	121	1163	18.0	26.0
3	邓宁	暨南大学生命科学技术学院抗体工程中心	60	325	11.0	15.0
4	陶俊	暨南大学生命科学技术学院抗体工程中心	4	9	2.0	3.0
5	龚义平	暨南大学生命科学技术学院抗体工程中心	3	9	2.0	3.0