HEK293F 细胞瞬时表达 PDGFR-β／Fc蛋白的条件优化

• 作者: 刘东晨 张途 洪坡 袁凤媚 谢秋玲 黄嘉慧
• 来源期刊: 中山大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: PDGFR-β/Fc HEK293F 细胞 瞬时表达
• 年，卷（期）: 2015,（5）
• 页码范围: 96-101
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 3802字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13471/j.cnki.acta.snus.2015.05.019

摘要

为优化 HEK293F 细胞瞬时转染条件，提高 PDGFR-β的蛋白表达量，采用聚乙烯亚胺（Polyetherimide， PEI）为转染试剂，将质粒 pXLG-PDGFR-β／Fc 与 PEI 混匀聚合后加入到细胞悬液，37℃，φ＝6％ CO2，180 r／min 悬浮振荡培养，培养7 d 后收集样品，ELISA 检测 PDGFR-β蛋白的浓度。对细胞密度、DNA 浓度和 m （DNA）：m （PEI）、聚合时间以及添加物（丙戊酸钠、葡萄糖和蛋白胨）进行优化。结果显示，HEK293F 细胞瞬时转染的最佳条件为：细胞密度4×106 cells／mL、DNA 浓度2.0μg／106 cells、m （DNA）：m （PEI）为1：2、聚合时间5 min。同时，48 h 内添加3 mmol／L 丙戊酸钠，第3天补加葡萄糖和1 g／L 的蛋白胨 TN1可使 PDGFR-β／Fc 的蛋白表达量明显提高。实验表明，经过对 HEK293F 细胞瞬时表达 PDGFR-β的转染条件的优化，蛋白表达量可达55 mg／L，为更大规模瞬时转染生产 PDGFR-β／Fc 蛋白奠定了基础。