在DH5α中拼接构建ADAM10全长真核表达载体的基因突变

• 作者: 刘桥 周丽荣 李小鸥 黄巍 黄晓刚
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: ADAM10 真核表达载体 拼接 突变 DH5α BL21(DE3)
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 4-8
• 分类号: Q786
• 字数: 3422字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2012.02.029

摘要

目的:构建ADAMI0真核表达载体,为进一步研究其生物学功能打基础.方法:将人ADAM10的上下两部分基因片段(分别为全长基因的1 ～910bp和911 ～2 247bp片段),依次与真核表达载体pcDNA3.1相连,以大肠杆菌DH5α或BL21(DB)作为感受态宿主菌用于转化连接产物,拼接成全长的阳性克隆通过PCR、酶切和测序鉴定.结果:ADAM10下段基因与已正确连入上段的pcDNA3.1重组质粒拼接时,若用DH5α为感受态菌,则下半段出现碱基插入增加512bp,测序结果显示为ADAM10基因第1 531 bp～2 042 bp间的序列有紧邻的双份；若用BL21(DE3)为感受态,则无突变.结论:将ADAM10基因与pcDNA3.1真核表达载体依次拼接构建重组质粒时,以DH5α为宿主菌可出现基因序列增加的罕见突变,而以BL21(DE3)为宿主则无突变,由此成功构建ADAM10全长基因与pcDNA3.1的重组质粒.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李小鸥	武汉大学人民医院儿科	11	16	2.0	3.0
2	黄巍	武汉市医学科学研究所基础医学研究室	14	20	3.0	3.0
3	周丽荣	武汉市医学科学研究所基础医学研究室	7	8	2.0	2.0
4	刘桥	武汉市医学科学研究所基础医学研究室	7	13	3.0	3.0
5	黄晓刚	武汉市医学科学研究所基础医学研究室	5	28	3.0	5.0