金黄色葡萄球菌肠毒素A基因的克隆及原核表达

• 作者: 关锐梨 周帅 周珍文 容莉莉 张妙莲 杨镒宇 谢永强 邓力 邓秋连
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 金黄色葡萄球菌 肠毒素A 克隆 表达
• 年，卷（期）: 2012,（9）
• 所属期刊栏目: 实验研究论著
• 页码范围: 1053-1056
• 分类号: R378.11
• 语种: 中文

摘要

目的 从分离培养的金黄色葡萄球菌中提取肠毒素A(SEA)基因,亚克隆入表达载体pET-28a(+),诱导融合蛋白的表达,为肠毒素A应用研究奠定基础.方法 根据GenBank中SEA的序列,设计一对特异性引物,以金黄色葡萄球菌DNA为模板PCR扩增SEA,纯化DNA进行BamH Ⅰ 、Xhol Ⅰ双酶切鉴定及测序鉴定,并与做相应酶切的pET-28a(+)连接,转化大肠杆菌BL21,并对质粒进行双酶切鉴定及基因序列分析,用IPTG诱导融合蛋白的表达,His标签单克隆抗体进行免疫印迹验证融合蛋白的表达.结果 以金黄色葡萄球菌DNA为模板,成功扩增了SEA基因,基因大小为774 bp,重组PET-28a(+)-SEA双酶切鉴定可见目的片段,测序结果显示SEA在正确读框中,序列比对分析显示其与相关报道核苷酸序列一致性达99.9％.经IPTG诱导后,SDS-PAGE可见pET-28a(+)-SEA/BL21在相应分子量(约30 000 Mr)条带大量表达,免疫印迹能检测到目的蛋白条带,说明其与His标签融合表达.结论 克隆了金黄色葡萄球菌SEA基因,并成功在大肠杆菌BL21中融合表达,为肠毒素A应用研究奠定了基础.