稳定表达Wnt3a基因的猪胰腺干细胞株的建立

• 作者: 张军林 彭莎
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 关键词: Wnt3a pIRES2-AcGFP1 重组质粒 胰腺干细胞(PSC)
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1300-1305
• 页数: 6页
• 字数: 4287字
• 语种: 中文

摘要

Wnt3a是经典Wnt通路上游的一个重要分泌蛋白,Wnt3a蛋白的活化可促进多种细胞的增殖和分裂.为了揭示Wnt3a在猪胰腺干细胞(PSC)增殖及分化中的调控机理,采用RT-PCR从pGKS2P(+)-Wnt3a质粒中扩增出Wnt3a全长片段,将测序正确的Wnt3a连接到带有水母绿色荧光蛋白(AcGFP1)报告基因的真核表达载体pIRES2-AcGFP1中,构建重组质粒.经EcoR I/BamH I酶切鉴定后,用脂质体转染至猪PSC.用抗生素G418筛选3周后获得稳转pIRES2-AcGFP 1-Wnt3a的细胞株.荧光显微镜下观察到几乎所有细胞表达绿色荧光蛋白.RT-PCR和Western blot的结果显示,稳转Wnt3a组的猪PSC中Wnt3a mRNA及蛋白表达水平比对照组明显升高.这些结果表明,稳定表达Wnt3a的猪胰腺干细胞株成功建立,为进一步研究Wnt3a在猪PSC增殖及分化中的作用机理提供了基础资料.