山羊痘病毒SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测方法的建立

• 作者: 姚俊 彭海生 李华春 杨永军 段国军 陈官国 鲁富有
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 山羊痘病毒 SYBR GreenⅠ 实时定量PCR
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 32-39
• 分类号: S852.654|Q789
• 字数: 6098字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2012.07.007

摘要

为了建立一种灵敏、特异、快速的山羊痘病毒实时定量检测方法,根据山羊痘病毒(AY077835)gp006基因序列,应用Beacon Designer 7.7软件设计合成一对PCR引物.将被检测的目的DNA片段克隆PEASY-T1质粒,制备重组质粒标准品,以期建立以质粒拷贝数为单位的标准曲线.通过反应条件的优化及引物浓度的筛选,建立了山羊痘病毒SYBR Green Ⅰ实时定量PCR(real-time PCR)检测方法,最佳引物浓度为400 nmol/L.组内重复试验和组间重复试验变异系数均低于2％,最低检测限为1×101 copies/μL,上机检测时间在1h以内.用该方法对2011年流行于云南华坪、景谷及2003年流行于云南宣威、寻甸和昆明的山羊痘临床组织样品进行定量检测,结果送检组织样品抽提DNA中病毒含量分别为1.03×105、5.30×103、1.51×104、4.74×103、7.20×104 copies/μL.结果表明,所建立的real-time PCR具有灵敏、特异、快速的特点,适合于山羊痘临床组织样品的定量检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	彭海生		14	22	3.0	4.0
2	姚俊	云南省畜牧兽医科学院云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室	27	126	7.0	9.0
3	鲁富有		12	20	3.0	4.0