基于qPCR的循环miRNA定量检测的方法探讨

• 作者: 马雪梅
• 来源期刊: 临床和实验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 血清miRNA 血浆miRNA 实时定量PCR
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 503-505
• 分类号: R440
• 字数: 1956字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-4695.2012.07.010

摘要

目的 探讨和优化循环miRNA检测方法,为进一步研究循环miRNA作为生物标记物提供方法学基础.方法 以miR-16和miR-21为检测目标,通过实时PCR的方法检测其表达量.比较传统Trizol法和miRNA提取试剂盒的miRNA提取效率;比较血清和血浆中miRNA含量;并对基于实时定量PCR(qPCR)的循环miRNA检测方法重复性和敏感性进行评价.结果 miRNA提取试剂盒的miRNA提取效率是传统Trizol法的16 435倍;血浆中miR-16和miR-21qPCR检测的Ct值为25.75±1.83、25.69±2.04,而血清miRNA检测Ct值为27.82±1.03、27.12±1.35,两者相比有显著差异;同一批血浆miR-16两次检测相关系数为0.8885,单个血浆样本10倍梯度稀释后Ct值拟合系数0.9865.结论 Trizol法提取循环miRNA效率低,血浆中miRNA含量较血清稍高,建议选取血浆为标本,通过miRNA提取试剂盒提取miRNA,然后行实时PCR检测其表达,该法具有较高的重复性和敏感性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马雪梅	首都医科大学附属北京友谊医院普外科实验室	49	396	10.0	17.0