丁型肝炎病毒ORF5基因片段的原核表达及在ELISA中的初步应用

• 作者: 刘旺根 孙新城 张怡青 李恒思 李玉林 王云龙 王国强 王娟 董彩文
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 丁型肝炎病毒 丁肝抗原 原核表达 ELISA
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 31-34
• 分类号: S852.659.1
• 字数: 3545字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2012.05.007

摘要

为获得HDAg抗原,以含有ORF5编码区基因的pETHD质粒为模板进行PCR扩增得到500bp大小片段,经过BamH Ⅰ、HindⅢ双酶切,与载体pET-30a连接,构建重组表达质粒pET-30a/HDAg,再转入细胞BL21( DE3),经过IPTG诱导表达和SDS-PAGE分析,表达蛋白分子质量约27 ku,经过Ni-NTA亲和层析纯化后,纯度达95％以上.将纯化的蛋白经HRP标记,初步建立ELISA捕获法,通过对24份标本检测和交叉反应试验,结果表明表达的抗原具有很好的反应原性和特异性,为建立丁型肝炎早期检测试剂盒提供材料.