抗CD40单链抗体的慢病毒载体的构建和表达

• 作者: 刘海燕 文丽君 王征 胡博 赵昀 赵李祥
• 来源期刊: 苏州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: CD40 scFv 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 方法与技术
• 页码范围: 228-232
• 分类号: R392-33
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆大鼠抗小鼠的抗CD40激活型抗体的单链抗体(CD40-scFv),并构建可表达大鼠抗小鼠的抗CD40抗体的单链抗体(CD40-scFv)的重组慢病毒.方法 采用RT-PCR法从分泌大鼠抗小鼠抗CD40激活型抗体的杂交瘤细胞株(FGK-115)中克隆VH和VL基因,用重叠延伸PCR法将VH和VL拼接在一起,构建抗CD40抗体的scFv基因,将CD40-scFv基因连接至PEGM-T克隆载体,限制性内切酶酶切及测序鉴定；构建含有大鼠抗小鼠的抗CD40激活型抗体的单链抗体(CD40-scFv)的慢病毒穿梭质粒,并与其它包装质粒一起通过磷酸钙法感染293T细胞；获得病毒颗粒并感染人慢性髓系白血病细胞MEG-01,检测其感染效率.结果 含大鼠抗小鼠的抗CD40激活型抗体的单链抗体(CD40-scFv)的慢病毒穿梭质粒构建成功；通过磷酸钙感染293T细胞所得病毒上清可成功感染MEG-01细胞,流式细胞术检测阳性率可达96％.结论 成功克隆了大鼠抗小鼠的抗CD40激活型抗体的单链抗体(CD40-scFv)基因,并建立其重组慢病毒表达系统,为后续的实验及应用研究工作奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵昀	苏州大学附属第一医院江苏省血液研究中心	6	9	2.0	2.0
2	赵李祥	苏州大学医学部生物医学研究院	10	19	2.0	4.0
6	刘海燕	苏州大学医学部生物医学研究院	62	177	9.0	10.0
10	胡博	苏州大学医学部生物医学研究院	9	14	2.0	3.0
11	文丽君	苏州大学医学部生物医学研究院	1	2	1.0	1.0
12	王征	苏州大学医学部生物医学研究院	3	6	2.0	2.0