铁皮石斛SCoT-PCR反应体系的优化

• 作者: 丁志山 吕圭源 徐旭栋 蒋瑞彬 蓝小明 金波 颜美秋
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: 铁皮石斛 目标起始密码子(SCoT)多态性 体系优化 遗传多样性分析 分子标记辅助育种
• 年，卷（期）: 2012,（12）
• 所属期刊栏目: 药材与资源
• 页码范围: 2481-2484
• 分类号: R282.12
• 语种: 中文

摘要

目的 对铁皮石斛的目标起始密码子(start condon targeted polymorphism,SCoT)多态性反应体系进行优化,为进一步对铁皮石斛遗传多样性的SCoT分析奠定基础.方法 以铁皮石斛的新鲜叶片为试验材料,采用控制单一变量的方法分别研究模板DNA用量、引物浓度、TaqDNA聚合酶用量、dNTPs浓度、及退火温度共5个因素对SCoT-PCR扩增结果的影响.结果 铁皮石斛SCoT标记的20 μL优化反应体系为:DNA模板20 ng、引物浓度为30 μmol/L、Taq DNA聚合酶用量为1.0 U、dNTP浓度为100 μmol/L.适宜的PCR扩增程序为95℃预变性4 min; 95℃变性50 s,56.1℃复性退火40 s,72℃延伸2 min,循环36次；72℃延伸5 min,4℃保存.1.5％琼脂糖凝胶电泳显示扩增产物在600～2 000 bp.结论 该体系的建立为铁皮石斛种质遗传多样性分析、分子标记辅助育种等研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕圭源		269	3790	30.0	48.0
2	丁志山		212	2228	24.0	40.0
3	颜美秋		30	456	11.0	21.0
4	金波		48	184	8.0	11.0
5	徐旭栋		6	10	2.0	3.0
6	蒋瑞彬		9	45	4.0	6.0
7	蓝小明		3	7	1.0	2.0