广西产拳卷地钱DNA的SCoT-PCR引物筛选及反应体系优化

• 作者: 尚小红 朱华 李平凤 李鹏 谢凤凤 黎理
• 来源期刊: 中国药房
• 学科: 医学
• 关键词: 拳卷地钱 SCoT PCR 引物筛选 体系优化
• 年，卷（期）: 2018,（10）
• 所属期刊栏目: 药学研究
• 页码范围: 1309-1312
• 页数: 4页
• 分类号: R932
• 字数: 3409字
• 语种: 中文
• DOI: 10.6039/j.issn.1001-0408.2018.10.04

摘要

目的:通过筛选引物并优化反应条件,建立以目标起始密码子多态性(SCoT)技术进行标记的广西产拳卷地钱DNA的聚合酶链式反应(PCR)体系.方法:采用改进的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法提取广西产拳卷地钱药材样品DNA,以凝胶电泳法与紫外分光光度法考察样品DNA的纯度和浓度;以样品DNA为模板,对36条SCoT引物进行PCR扩增反应,并对产物进行电泳、染色、成像以筛选合适引物;以DNA浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶浓度等5个主要因素进行5因素4水平的正交试验,对SCoT-PCR反应体系条件进行优化.结果:所提取的样品DNA条带整齐,无RNA污染、无降解、无弥散荧光,加样孔清晰;260、280 nm紫外波长处吸光度比值在1.8～2.0范围内,样品DNA纯度和浓度均适合后续试验;36条引物PCR结果显示,4号引物所得产物条带整齐、无弥散荧光且亮度最高,故以其为引物进行PCR反应;最佳SCoT-PCR反应体系为30.00μg/mL DNA、2.00 mmol/L Mg2+、0.20 mmol/L dNTP、0.40μmol/L引物、0.50 U/mL Taq DNA聚合酶(总反应体积20μL).结论:筛选得到合适的样品DNA的SCoT-PCR引物并优化了反应体系,可为广西产拳卷地钱的品种鉴定、遗传多样性评价及亲缘关系分析提供技术基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱华	广西中医药大学科学实验中心	167	1084	16.0	25.0
2	李鹏	广西中医药大学科学实验中心	37	320	10.0	17.0
3	谢凤凤	广西中医药大学科学实验中心	27	29	3.0	3.0
4	黎理	广西中医药大学科学实验中心	54	81	5.0	5.0
5	李平凤	广西中医药大学科学实验中心	7	2	1.0	1.0
6	尚小红		3	12	2.0	3.0