葡萄球菌肠毒素A和黑色素瘤抗原A3基因重组真核共表达载体的构建及其在293T细胞的表达

• 作者: 刘启才 吉晓滨 吕景礼 谢景华 陈敬贤
• 来源期刊: 中国耳鼻咽喉头颈外科
• 学科: 医学
• 关键词: 葡萄球菌属 超抗原 真核细胞 基因 喉肿瘤 克隆,分子
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 349-353
• 分类号: R739.65
• 字数: 4433字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建葡萄球菌肠毒素A (staphylococcal endotoxin A,SEA)和喉癌来源的黑色素瘤抗原A3(melanoma-associated antigen A3,MAGE-A3)基因共表达的真核表达载体,检测、鉴定其在293T细胞中的表达情况.方法 分别用RT-PCR方法及人工化学合成法获得MAGE-A3和SEA基因片段,然后依次将MAGE-A3和SEA基因克隆至含内部核糖体进入位点的真核表达载体IRES序列的上、下游,构建成重组质粒pMGEA3-IRES-SEA.经脂质体转染至293T细胞以后,用荧光定量PCR、蛋白免疫印迹分别鉴定SEA和MAGE-A3基因的表达.结果 限制性内切酶酶切分析证实MAGE-A3和SEA基因均正确地克隆在pMAGEA3-IRES-SEA中,基因测序结果与GenBank公布的MAGE-A3、SEA序列完全一致,实现了双基因的正确重组.重组质粒转染293T细胞后能检测到MAGE-A3、SEA基因的高水平的有效表达.稳定表达双基因的293T细胞上清对外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)增殖有促进作用,与细胞中SEA的表达和分泌有关.结论 成功地构建了pMAGEA3-IRES-SEA真核表达质粒,并能在293T细胞中有效表达MAGE-A3和SEA蛋白,由此奠定了其作为抗喉癌DNA疫苗应用的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘启才	广州医学院实验医学研究中心	83	316	10.0	13.0
2	吉晓滨	广州市第一人民医院耳鼻咽喉科	48	188	8.0	10.0
3	吕景礼	广州医学院实验医学研究中心	5	14	3.0	3.0
4	陈敬贤	美国哥伦比亚大学医学院	8	37	3.0	6.0
5	谢景华	广州市第一人民医院耳鼻咽喉科	81	360	10.0	15.0