扩展莫尼茨绦虫DAZ基因保守结构域所在片段的克隆及原核表达

• 作者: 夏党荣 王涛 王静梅 薄新文 马勋
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（上半月）
• 学科: 生物学
• 关键词: 扩展莫尼茨绦虫(Moniezia expansa) 无精症缺失(DAZ)基因 克隆 原核表达
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 畜牧科学
• 页码范围: 43-46
• 页数: 4页
• 分类号: Q785
• 语种: 中文

摘要

为了克隆和表达编码扩展莫尼茨绦虫无精症缺失(DAZ)基因,试验根据GenBank中扩展莫尼茨绦虫DAZ基因cDNA序列(登录号为GH291478)设计1对特异性引物,以扩展莫尼茨绦虫组织总RNA为模板,RT - PCR扩增DAZ基因,并克隆到pMD19 -T载体中进行序列测定,构建重组质粒pET28a - DAZ,转化BL21( DE3)大肠杆菌感受态细胞,以异丙基-β -D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达；利用非变性聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)分析表达产物,通过螯合琼脂糖凝胶FF亲和层析柱对重组蛋白进行纯化.结果表明:重组DAZ基因在大肠杆菌中高效表达,表达的融合蛋白分子量约为14 ku.