利用免疫蛋白质组学鉴定炭疽杆菌蛋白MetK及其免疫原性验证

• 作者: 任静晓 冯尔玲 刘先凯 廖祥儒 朱力 王东澍 王恒樑 童超 高志奇
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 医学
• 关键词: 免疫蛋白质组学 metK 芽孢杆菌 炭疽 基因表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 115-119
• 分类号: R392|R378.7
• 字数: 4308字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-9960.2012.02.010

摘要

目的 验证免疫蛋白质组中鉴定到的S-腺苷甲硫氨酸MetK蛋白的免疫原性.方法 免疫蛋白质组学的方法鉴定到MetK蛋白,通过PCR方法扩增metK基因全长,然后将其克隆到原核表达载体pET32a中,转化大肠杆菌DH5α,测序正确后提取质粒转入BL21(DE3)中进行诱导表达.再通过Ni-NTA柱纯化MetK蛋白,纯化后的蛋白免疫SPF级的BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,通过多克隆抗体与炭疽芽孢杆菌A16R全菌蛋白Western印迹检测,验证MetK蛋白的免疫原性.结果与结论成功表达了MetK蛋白,制备了其多克隆抗体,为免疫蛋白质组学鉴定到的蛋白点进行验证,也为研究MetK蛋白的生物学功能研究提供了条件.