裂谷热病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 冯娜 夏咸柱 朱晓文 李林 桑晓宇 步志高 王铁成 胡桂学 高玉伟
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 裂谷热病毒 实时荧光定量PCR TaqMan探针
• 年，卷（期）: 2012,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 315-318
• 分类号: R181.2
• 字数: 2997字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2012.04.001

摘要

目的 根据裂谷热病毒(Rift Valley Fever Virus,RVFV)M片段的保守序列设计并合成特异性引物和TaqMan探针,建立鉴定裂谷热病毒的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法.方法 合成裂谷热病毒M片段基因,PCR扩增后将其连入pMD18-T载体,构建重组质粒作为阳性标准品,以10倍系列稀释的标准品进行荧光定量PCR扩增,并绘制标准曲线.结果 所绘制标准曲线的相关系数为0.999,该检测方法的灵敏度达40 copies/μL,特异性好,对除裂谷热病毒外其他病毒(PPRV、HFV、RV、SPPV和GIPV)检测均为阴性.该方法重复性好,批内重复和批间重复的变异系数均小于1%.结论 裂谷热病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立为裂谷热病毒的快速准确诊断及流行病学调查提供了有效的手段.