SYBR Green Ⅰ实时PCR对猪细小病毒体外复制动态分析

• 作者: 周欣 姚慧霞 常洪涛 杨霞 王川庆 王新卫 赵军 迪力拜尔·阿木提 陈陆 顾帅
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪细小病毒 SYBR Green Ⅰ实时PCR 病毒复制 动态分析
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 350-354
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文

摘要

根据已经发表的猪细小病毒（PPV）的VP2基因序列,设计2对特异性引物,建立了检测PPV的SYBR GreenⅠ实时PCR方法。该方法最小检出量为12个PPV拷贝。模板稀释度在108范围内呈良好的线性关系,与猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、乙型脑炎病毒、猪瘟病毒、伪狂犬病病毒无交叉反应。应用本方法对PPV在体外感染细胞后的复制动态进行了观察,并绘制了病毒的体外增殖曲线。数据换算为每瓶中细胞内、外病毒拷贝数,结果显示细胞外病毒含量在接毒初始的36h逐渐下降,随后开始逐步增加;接毒后84h培养液中的病毒含量（1.739×1010拷贝）逐渐超过细胞内的病毒含量（1.321×1010拷贝）;在接毒后108h培养液中病毒含量达到峰值（7.626×1010拷贝）,随即病毒含量开始快速下降。细胞内病毒粒子在接毒后24h内为对数增长期,然后为缓慢增长期,至接种后72h达到复制峰值（1.425×1010拷贝）,并维持至108h。与病毒复制动态变化相对应的细胞病变是从细胞聚集、开始形成空斑到约80%的细胞病变产生,108h之后随着细胞的大量死亡,细胞内、外病毒数量都开始急剧减少。