牛新孢子虫内标双重荧光PCR检测方法的建立

• 作者: 刘小兰 季新成 段晓东 牛国辉 郑培 黄玲
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 犬新孢子虫 内标 双重荧光PCR
• 年，卷（期）: 2012,（3）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 406-410
• 分类号: S852.723
• 字数: 3838字
• 语种: 中文

摘要

为建立牛新孢子虫的快速准确检测方法,根据犬新孢子虫种属特异性基因Nc-5序列,设计高度保守的引物和荧光探针,通过引物设计和搭桥PCR法扩增,获得Nc-5荧光PCR内标模板。对内标模板的添加量和反应条件进行优化,建立了牛新孢子虫内标双重荧光PCR检测体系。该方法具有较好的特异性;可以检测到10个拷贝/PCR反应的核酸分子,与不加内标的荧光PCR检测灵敏度相当;通过对系列稀释的核酸样品的重复性检测,变异系数为0.50%～1.30%。通过对58份临床样品分别用该方法、不含内标的荧光PCR方法和普通PCR方法检测,结果显示,该方法与不含内标的荧光PCR方法的阳性检出率均为10.3%,比普通PCR方法阳性检出率（7.0%）高;表明该方法可用于临床样品中牛新孢子虫的快速检测,并能对实验室进行质量控制。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	季新成		42	156	7.0	8.0
2	黄玲		18	150	6.0	11.0
3	刘小兰		7	21	3.0	4.0
4	段晓东		6	40	4.0	6.0
5	牛国辉		4	27	4.0	4.0
6	郑培		2	15	2.0	2.0