白细胞介素-2基因表达质粒对犬细小病毒VP2DNA疫苗在小鼠的免疫增强作用

• 作者: 仲飞 张峰 李振 李秀锦 潘红丽 王幸兴 王璐 韩云珍
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 白细胞介素-2 生物佐剂 细小病毒 VP2 DNA疫苗
• 年，卷（期）: 2012,（11）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1634-1639,1644
• 分类号: S852.655
• 语种: 中文

摘要

犬细小病毒编码的VP2蛋白是该病毒主要抗原蛋白。研究证实由VP2基因制备的DNA疫苗能够刺激机体产生免疫应答反应。为提高VP2DNA疫苗的免疫原性，本研究在小鼠体内尝试了利用犬白细胞介素2（cIL-2）基因增强VP2DNA疫苗免疫应答的研究。通过RT-PCR方法从犬脾淋巴细胞中分别扩增含终止密码子和不合终止密码子的cIL-2cDNA基因，然后将基因插入到真核表达载体pcDNA3．1中，分别构建成非融合的和与Myc／His融合的clL-2基因真核分泌型表达载体，pcDNA-cIL-2和pcDNA-cIL-2／MH。将pcDNA-oIL-2／MH表达栽体通过磷酸钙方法转染HEK293T细胞进行瞬时表达，以确定构建的表达栽体能否介导cIL-2在真核细胞中进行分泌表达。然后用VP2表达载体（pcDNA-CD5sp-VP2，本室构建）单注射和VP2／IL-2表达载体共注射对小鼠进行免疫（用pcD-NA3．1栽体作为阴性对照）。免疫后通过ELISA方法检测免疫后不同时期小鼠血清VP2的抗体水平，并通过细胞增殖试验检测免疫后小鼠脾脏淋巴细胞的增殖反应，用ELISA方法测定小鼠淋巴细胞γ干扰素的表达水平。试验结果表明，扩增的小鼠cIL-2基因与GenBank的参考序列一致，构建的cIL-2表达载体能够介导重组cIL-2在HEK293T细胞中进行分泌表达。免疫结果显示，利用cIL-2／VP2表达载体共免疫小鼠，免疫后35d血清中VP2的抗体水平达到1：5120，明显高于VP2表达载体单免疫组（P〈0．01）。淋巴细胞增殖试验表明，2组免疫小鼠的淋巴细胞刺激指数均明显高于阴性对照组（P〈0．01），共免疫组的刺激指数又明显高于单免疫组（P〈0．05）。共免疫小鼠淋巴细胞7干扰素的表达水平明显高于单免疫组和阴性对照组（P〈0．01）。由此可见，cIL-2表达载体可明显提高CPVVP2基因疫苗的免疫应答水平。