EZH2靶向的shRNA质粒的构建和有效靶序列的筛选

• 作者: 丁涟沭 卜向飞 卞爱苗 吕佳 孙晓阳 蒋健 金孝东
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: zeste基因增强子人类同源物2 RNA干扰 质粒 胶质瘤
• 年，卷（期）: 2012,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1211-1214,1250
• 分类号: Q75|Q78|R739.41
• 语种: 中文

摘要

目的:构建并筛选靶向zeste基因增强子人类同源物2(Enhancer of zeste homologue2,EZH2)的短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)的质粒表达栽体.方法:设计并合成针对EZH2基因的带有小发夹结构的DNA片段并克隆至质粒pGPU6/GFP/Neo中,经酶切和测序分析后转染入胶质瘤U251细胞,分别应用实时荧光定量PCR和Western bloting在mRNA和蛋白质水平观察其对EZH2基因表达的沉默效果.结果:重组质粒构建成功,并成功转染入胶质瘤U251细胞,转染效率大约为70％.其中,以靶向hEZH2-715序列的质粒抑制效果最好,其对U251细胞EZH2mRNA和protein抑制率分别为55％和89％.结论:成功构建了能高效抑制EZH2基因表达shRNA的重组质粒,为下一步探索EZH2在胶质瘤细胞中的生物学作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	丁涟沭	南京医科大学附属淮安第一医院脑外科	83	529	13.0	19.0
2	孙晓阳	南京医科大学附属淮安第一医院脑外科	58	243	9.0	14.0
3	蒋健	南京医科大学附属淮安第一医院脑外科	20	91	6.0	8.0
4	金孝东	南京医科大学附属淮安第一医院脑外科	22	77	5.0	7.0
5	卜向飞	南京医科大学附属淮安第一医院脑外科	4	7	2.0	2.0
6	卞爱苗	南京医科大学附属淮安第一医院脑外科	7	14	2.0	3.0
7	吕佳	南京医科大学附属淮安第一医院脑外科	2	11	1.0	2.0