慢病毒介导的大鼠肝BRL-3A细胞Tmub1基因沉默及稳定感染细胞系的建立

• 作者: 刘孟刚 刘宏鸣 周波 王宝林 王晓枫 陈平 陈红旭
• 来源期刊: 现代生物医学进展
• 学科: 医学
• 关键词: Tmub1 RNA干扰 慢病毒载体 BRL-3A
• 年，卷（期）: 2012,（16）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 3019-3025
• 分类号: R575
• 语种: 中文

摘要

目的:构建Tmubl基因慢病毒干扰载体,建立稳定转染细胞系,检测大鼠肝BRL-3A细胞中Tmub1基因表达的干扰效果.方法:设计并构建4对针对大鼠Tmub1基因的特异性shRNA干扰质粒,酶切鉴定、DNA测序所得质粒.将由pRSV-Rev、pMDLg-pRRE、pMD2G和pll3.7干扰质粒组成的包装系统共转染293T细胞,产生慢病毒.所得慢病毒感染大鼠正常肝细胞BRL-3A,Western Blot检测不同靶点RNAi后Tmubl蛋白表达情况,确定有效靶点.针对有效靶点大量包装慢病毒.测定病毒滴度并以最适感染复数(multiplicity of infection,MOI)感染BRL-3A细胞后,G418抗生素筛选稳定感染细胞系BRL-3A/256.RT-PCR和Western Blot检测各组细胞Tmub1 mRNA和蛋白质的表达差异.结果:结果显示Tmub1 RNAi慢病毒载体构建成功,C0020Sh2-Hops-256干扰靶点RNAi效果最强.成功包装Tmub1基因RNAi慢病毒,测定病毒滴度为2.3× 108TU/ml,对293T细胞的最适感染复数为60.成功建立Tmub1 RNAi慢病毒载体稳定感染细胞系BRL-3A/256,且在该细胞系中Tmub1 mRNA和蛋白质表达明显降低.结论:成功构建Tmub1 RNAi慢病毒载体,有效干扰BRL-3A细胞中Tmub1 mRNA和蛋白表达；成功筛选出Tmub1RNAi慢病毒稳定感染细胞系BRL-3A/256.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈平	第三军医大学大坪医院肝胆外科	82	529	12.0	19.0
2	王晓枫	武警总医院肝脏移植研究所	16	25	3.0	3.0
3	刘孟刚	第三军医大学大坪医院肝胆外科	32	137	6.0	10.0
4	刘宏鸣	第三军医大学大坪医院肝胆外科	39	232	9.0	13.0
5	周波	第三军医大学大坪医院肝胆外科	27	176	7.0	12.0
6	王宝林	第三军医大学大坪医院肝胆外科	1	2	1.0	1.0
7	陈红旭	第三军医大学大坪医院肝胆外科	2	2	1.0	1.0