老芒麦ISSR-PCR反应体系的建立与优化

• 作者: 刘磊 周国栋 师文贵 扈顺 李志勇 李鸿雁
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 老芒麦 ISSR 正交试验 单因素试验
• 年，卷（期）: 2012,（28）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 13709-13712,13719
• 页数: 5页
• 分类号: S543
• 字数: 3466字
• 语种: 中文

摘要

[目的]建立并优化老芒麦ISSR - PCR反应体系和扩增程序,以期为探讨老芒麦种质资源的遗传多样性提供科学依据.[方法]采用正交设计试验和单因素试验相结合的方法对老芒麦的ISSR - PCR的反应体系进行构建和优化,对影响ISSR - PCR扩增效果的Taq酶、模板DNA的浓度、Mg2+、dNTP和引物浓度等因素进行优化,同时对退火温度、循环次数和延伸时间进行筛选.[结果]在25μl体系中各反应物的最适含量为:0.2 mmol/L dNTP,0.2 μmol/L ISSR引物,1.50 U Taq DNA聚合酶,2.5μl 10×PCR Buffer,1.5 mmol/L MgCl2 和40 ng模板DNA;循环次数和延伸时间分别是35次和90 s.[结论]该研究建立并优化了老芒麦ISSR - PCR反应体系,通过2份老芒麦种质对所优化体系得验证,结果显示体系稳定,可用于老芒麦种质资源遗传分析.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李志勇	中国农业科学院草原研究所	62	686	14.0	22.0
2	刘磊	中国农业科学院草原研究所	68	562	13.0	20.0
3	李鸿雁	中国农业科学院草原研究所	39	340	11.0	15.0
4	师文贵	中国农业科学院草原研究所	41	434	12.0	17.0
5	周国栋	中国农业科学院草原研究所	2	14	2.0	2.0
9	扈顺	内蒙古农业大学生态环境学院	13	48	4.0	6.0