人miR-146b慢病毒载体构建及人脂肪细胞中表达验证

• 作者: 史春梅 季晨博 张春梅 徐广峰 朱璐 杨蕾 郭锡熔 陈玲
• 来源期刊: 中国儿童保健杂志
• 学科: 医学
• 关键词: miR-146b 慢病毒 人脂肪前体细胞
• 年，卷（期）: 2013,（11）
• 所属期刊栏目: 基础科研论著
• 页码范围: 1155-1157,1160
• 分类号: R394
• 语种: 中文

摘要

目的 构建人miR 146b慢病毒表达载体,包被病毒并检测其在人脂肪细胞中过表达效果.方法 以人基因组DNA为模板,PCR高保真扩增包含miR-146b区域上下游各100bp左右的基因组DNA,亚克隆入慢病毒表达载体,与包装质粒共转染HEK-293T细胞,包装病毒,收取病毒上清,纯化后感染人脂肪前体细胞,36 h开始观察荧光标记,72 h收取细胞,抽提RNA,Realtime PCR检测慢病毒感染下miR-146b的相应表达量.结果 成功构建人miR-146b慢病毒表达载体,包装获得的病毒感染人脂肪细胞的效率可达到85％以上,miR-146b过表达水平可接近4倍.结论 本研究成功构建了人miR-146b慢病毒表达载体,包被的慢病毒可以在人脂肪细胞中实现过表达效果,为后续功能研究奠定了基础.