一种增加重组毕赤酵母拷贝数提高胰岛素前体产量的策略

• 作者: 丁重阳 刘立明 吴静 龚香艺
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 多拷贝重组毕赤酵母 胰岛素前体产量 重复电转 pPICZα
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 生理和代谢
• 页码范围: 545-552
• 分类号: Q935
• 语种: 中文

摘要

[目的] 为了进一步提高毕赤酵母表达生产人胰岛素前体的产量,[方法] 将构建的表达载体pPICZα-IP 电转至毕赤酵母X-33中,在100 μg/mL zeocin的YPDS抗性平板筛选获得过量表达人源胰岛素前体(IP)的重组菌株B4和S6.在此基础上,以过量表达胰岛素前体的B4和S6为出发菌株,以SacI线性化的表达载体pPICZα-IP进行重复电转化,并在1000 μg/mL zeocin的YPDS平板上筛选获得一株拷贝数为7的重组毕赤酵母2B4.[结果] 该菌株在5L规模发酵罐上,人源胰岛素前体产量是低拷贝数菌株B7的2.7倍,且菌体并未因拷贝数高而表现出生长不良的现象.实时定量PCR检测后,发现2B4菌株胰岛素前体基因的转录水平是B7的2倍.[结论] 综上结果表明,采用抗性筛选和重复电转相结合的高拷贝重组毕赤酵母构建策略,能有效促进目的基因的转录水平,最终显著提高目标蛋白的产量.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	丁重阳	江南大学食品科学与技术国家重点实验室	52	441	12.0	19.0
5	吴静	江南大学无锡医学院	29	177	8.0	12.0
9	刘立明	江南大学食品科学与技术国家重点实验室	70	547	15.0	19.0
13	龚香艺	江南大学食品科学与技术国家重点实验室	1	9	1.0	1.0