RT PCR检测毕赤酵母外源β甘露聚糖酶基因拷贝数

• 作者: 吴丽双 吴俊子 周洪波 林福来 郑甲 郭宁
• 来源期刊: 生物加工过程
• 学科: 生物学
• 关键词: 实时荧光定量PCR 毕赤酵母 基因拷贝数 β 甘露聚糖酶
• 年，卷（期）: 2014,（5）
• 所属期刊栏目: 研究与开发
• 页码范围: 46-50
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3264字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3678.2014.05.008

摘要

利用荧光定量PCR方法检测毕赤酵母外源β甘露聚糖酶基因（ man）拷贝数。以毕赤酵母中高度保守基因三磷酸甘油醛脱氢酶基因（ gap）为内参基因，分别构建含有gap和man的克隆质粒，进行RT PCR反应构建gap和man双标准曲线；获得的双标准曲线具有良好的重复性，其相关系数（ R2）均为0?999，其扩增效率分别为105?1％和102?2％。提取含有外源man基因的毕赤酵母基因组进行RT PCR检测，通过双标准曲线计算出外源man基因的拷贝数。结果显示：预先经过博莱霉素（ Zeoicn）抗性筛选得到的10株毕赤酵母重组菌株中含有1、2、3、4、5和7个不等拷贝的β甘露聚糖酶基因。结果表明该方法能够高效快速筛选和鉴定出含有不同外源β甘露聚糖酶基因拷贝数的毕赤酵母重组菌株。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周洪波	中南大学资源加工与生物工程学院	65	575	14.0	20.0
5	郑甲	中南大学资源加工与生物工程学院	10	42	3.0	6.0
6	郭宁	中南大学资源加工与生物工程学院	14	72	5.0	8.0
7	吴俊子	中南大学资源加工与生物工程学院	3	16	2.0	3.0
8	林福来	中南大学资源加工与生物工程学院	2	5	2.0	2.0
9	吴丽双	中南大学资源加工与生物工程学院	5	8	2.0	2.0