利用流感病毒反向遗传学操作系统表达绿色荧光蛋白(EGFP)

• 作者: 吴杨 喻明霞 徐军强 徐柯 邢学森 龚晓艳
• 来源期刊: 公共卫生与预防医学
• 学科: 医学
• 关键词: 反向遗传学 荧光蛋白基因 克隆 转染 293T细胞
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 4-8
• 分类号: R373.1+3
• 语种: 中文

摘要

目的 构建基于RNP复合体的流感病毒反向遗传学操作系统,并利用该系统表达绿色荧光蛋白.方法 将人源pol Ⅰ启动子分别插入真核表达载体pcDNA3和原核质粒pUC18,获得pol Ⅰ/pol Ⅱ双启动子表达载体pCHBW和pol Ⅰ单启动子表达载体pPol IR;来源于禽流感病毒H5N1湖北分离株A/Chicken/Hubei/489/2004的基因被克隆到pCHBW上,获得pCHBW-PB2、pCHBW-PB1、pCHBW-PA、pCHBW-NP;将荧光蛋白基因置换NA基因的编码区进而克隆到pPol IR上获得pPol IR-NA (EGFP)；这些质粒共转染293T细胞并观察荧光.结果 所构建的载体均经酶切和测序验证正确.pCHBW-PB2、pCHBW-PB1、pCHBW-PA、pCHBW-NP和pPol IR-NA (EGFP)共转染293T细胞后能观察到绿色荧光,Western-blot实验证实被转染的293T细胞表达绿色荧光蛋白(EGFP).结论 基于RNP复合体的反向遗传操作系统构建成功,并表达绿色荧光蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	喻明霞		24	85	4.0	8.0
2	邢学森		33	371	8.0	18.0
3	吴杨		43	200	8.0	13.0
4	徐军强		16	57	5.0	6.0
5	龚晓艳		3	19	2.0	3.0