Cyr61真核表达载体构建及在人原代培养软骨细胞中的表达研究

• 作者: 吕海燕 朱敏 汪志军 洪盾 潘伟波 王晨 范厉龙
• 来源期刊: 医学研究杂志
• 关键词: 软骨细胞 原代培养 Cyr61 基因转染 组织工程
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 104-109
• 页数: 6页
• 字数: 4716字
• 语种: 中文

摘要

目的 通过体外原代培养获得人软骨细胞,将重组真核表达载体pcDNA3.1-cyr61转染人软骨细胞,探讨外源性cyr61在软骨细胞中的表达效应.方法 应用机械分离联合胶原酶消化法,原代培养获得人软骨细胞,镜下观察及扫描电镜分析软骨细胞形态,Ⅱ型胶原(CollagenⅡ)免疫细胞化学及甲苯胺蓝染色鉴定软骨细胞表型；构建pcDNA3.1-cyr61真核表达载体,Fugene介导转染人软骨细胞,Western blot验证其表达效应；RT-PCR检测重组质粒转染后软骨细胞CollagenⅡ、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)基因mRNA表达改变.结果 Ⅱ型胶原免疫细胞化学、甲苯胺蓝染色及形态学分析证实原代培养获得的细胞为人软骨细胞；酶切与DNA测序显示pcDNA3.1-cyr61重组质粒成功构建,Western blot检测表明外源性cyr61重组质粒能有效表达于人原代软骨细胞,且目的蛋白cyr61表达水平较空白组细胞明显升高；cyr61重组质粒转染软骨细胞后其CollagenⅡ、AggrecanmRNA表达呈明显增高.结论 Cyr61蛋白在人原代培养软骨细胞中呈表达缺失,外源性cyr61基因能有效表达于人软骨细胞,并且能增加软骨细胞CollagenⅡ、Aggrecan基因的mRNA表达,为进一步利用cyr61基因修饰软骨细胞增强其生物学功能奠定基础.