4E-BP1、4E-BP1-4A 重组慢病毒载体的构建及对胃癌细胞 HGC27生长的影响

• 作者: 伍飞马 刘萱 周建光 张晓清 李山虎 李海量 王健 王洪涛 罗国兰 薛萌 赵亚丽
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 4E-BP1 4E-BP1-4A 慢病毒载体 胃癌 细胞生长
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 页码范围: 193-196
• 分类号: Q78|Q24
• 字数: 2951字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2013.02.011

摘要

目的:构建4E-BP1及其 T37A、T46A、S65A、T70A 突变体4E-BP1-4A 基表达的重组慢病毒载体,研究其对胃癌 HGC27细胞生长的影响.方法:PCR 扩增4E-BP1基及其突变体4E-BP1-4A 基并克隆到 pCDH 载体,构建成 pCDH-4E-BP1、pCDH-4E-BP1-4A,将其与包装载体共转染293T 细胞,包装成 Lenti-4E-BP1及 Lenti-4E-BP1-4A重组慢病毒载体,将此慢病毒感染胃癌 HGC27细胞,Western 印迹鉴定病毒载体介导的4E-BP1、4E-BP1-4A 蛋白的表达,MTT、克隆形成和软琼脂方法研究过量表达4E-BP1、4E-BP1-4A 对胃癌 HGC27细胞生长的影响.结果:包装成 Lenti-4E-BP1及 Lenti-4E-BP1-4A 重组慢病毒载体,并将此慢病毒载体感染胃癌 HGC27细胞;MTT、克隆形成、软琼脂实验表明过量表达4E-BP1可抑制胃癌 HGC27细胞的生长,过量表达4E-BP1-4A 时抑制效果更明显.结论:构建了4E-BP1、4E-BP1-4A 的重组慢病毒表达载体,在胃癌 HGC27细胞中过量表达4E-BP1可抑制细胞生长,过量表达4E-BP1-4A 的抑制效果更明显.