单重靶向条件复制型腺病毒穿梭载体pshuttle-E1A-E1Bp-E1B55K的构建及鉴定

• 作者: 刘威武 刘扬 李艳博 李金华 王宏芳 王志成 龚守良
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 条件复制型腺病毒 穿梭载体 E1A基因
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 821-824
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的:构建并鉴定一种新型E1A基因CR2区选择性缺失的腺病毒穿梭载体pshuttle-E1A-E1Bp-E1B55K,为包装单重靶向条件复制型腺病毒进行肿瘤基因治疗奠定基础.方法:采用RT-PCR法从人胚肾细胞(293T)中扩增条件复制型腺病毒必需的E1区基因,包括E1A、E1Bp及E1B55K基因片段;重叠PCR法扩增CR2区缺失的E1A基因;采用基因重组技术构建pshuttle-E1A-E1Bp-E1B55K重组质粒,并进行PCR及酶切鉴定.结果:经测序证实获得的E1B55K及CR2区缺失的E1A基因与GenBank公布的完全一致,E1A基因CR2区缺失的pshuttle-E1A-E1Bp-E1B55K质粒经分别经XbaⅠ与KpnⅠ单酶切,得到大小约为817和1 244 bp的酶切片段,PCR鉴定得到约250及1 148bp的基因片段,鉴定结果与预期结果完全一致.结论:E1A基因CR2区选择性缺失的单重靶向条件复制型腺穿梭载体pshuttle-E1A-E1Bp-E1B55K构建成功.