羊口疮病毒SYBR Green Ⅰ染料法实时荧光定量PCR的建立及运用

• 作者: 姚俊 张乔明 彭海生 李华春 李富祥 鲁富有
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（上半月）
• 学科: 农学
• 关键词: 羊口疮病毒 SYBR Green Ⅰ 实时荧光定量PCR 建立 应用
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 15-19,22
• 页数: 6页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文

摘要

为了建立一种特异、灵敏、快速、重复性好和检测成本低的羊口疮病毒检测方法,试验根据GenBank中羊口疮病毒(登录号为AY386264)ORFVgORF102基因DNA序列,应用Beacon Designer 7.0软件设计、合成了1对SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR引物.结果表明:经反应条件优化后,建立了羊口疮病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR,最佳引物浓度为400 nmol/L,最佳模板浓度为3.61 ～36.1 ng/μL或2.385×107 ～2.385 × 108copies/μL;该方法组内及组间变异系数均小于2％,检测灵敏度可达到3.61 pg/μL或2.385×104 copies/μL,上机检测时间不超过1h;运用该方法对2份临床样品进行定量检测,样品抽提DNA中病毒拷贝数分别为1.4×109copies/μL和8.7 × 108copies/μL.说明试验所建立的羊口疮病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR具有特异、灵敏、快速、重复性好和检测成本低等优点,适合于羊口疮病毒临床样品的检测.