金针菇谷氨酸脱氢酶基因的克隆及原核表达

• 作者: 刘泓 刘选明 朱咏华 李磊 杜长青 杨远柱 林建中
• 来源期刊: 生命科学研究
• 学科: 生物学
• 关键词: FvGDH Gateway克隆 原核表达 SDS-PAGE Western blotting
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 230-237
• 页数: 8页
• 分类号: Q786
• 字数: 6730字
• 语种: 中文

摘要

利用简并引物和RT-PCR方法从金针菇(Flammulina velutipes)幼嫩子实体中克隆获得Fv GDH全长cDNA序列.构建入门载体pGWC-Fv GDH,利用Gateway克隆技术的LR反应构建原核重组表达载体pDEST17-FvGDH,转化大肠杆菌BL21 (DE3).通过IPTG法诱导表达融合蛋白并进行表达条件优化.SDS-PAGE蛋白电泳分析表明,融合蛋白相对分子质量约为53 kD,与预测的一致.最佳表达条件为温度30℃、IPTG浓度0.4mmol/L、诱导4h.融合蛋白表达量较高,实现了FvG DH的高效表达,并利用Western blotting对其特异性进行鉴定.FvGDH基因高效原核表达体系的成功建立,为进一步研究FvGDH的酶促动力学奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨远柱		78	494	12.0	19.0
2	刘选明	湖南大学生物学院	88	747	16.0	23.0
3	刘泓	福建农林大学资源与环境学院	18	290	9.0	17.0
4	林建中	湖南大学生物学院	10	32	4.0	5.0
5	李磊	湖南大学生物学院	17	50	4.0	6.0
6	朱咏华	湖南大学生物学院	14	149	6.0	12.0
7	杜长青	湖南大学生物学院	1	6	1.0	1.0