木聚糖酶-甘露聚糖酶融合酶基因Linker优化及其在猪肾pK15细胞中共表达

• 作者: 刘德武 吴珍芳 孟繁明 张冠冠 张献伟 张茂 李真 李紫聪 许卫华 贺晓燕 郑恩琴
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 木聚糖酶 甘露聚糖酶 Linker 融合酶 酶活测定
• 年，卷（期）: 2013,（22）
• 所属期刊栏目: 畜牧?兽医?资源昆虫
• 页码范围: 4774-4783
• 页数: 10页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.22.015

摘要

[目的]构建木聚糖酶（XynB）与甘露聚糖酶（ManA）的融合酶基因，使其能在哺乳动物表达系统中表达并分泌兼有木聚糖酶和甘露聚糖酶活性的双功能融合酶。[方法]利用基因融合技术（SOE-PCR），把11条Linker融合到木聚糖酶（XynB）和甘露聚糖酶（ManA）基因间，构建真核表达载体，经转染猪肾细胞（pK15）收集细胞培养液，用DNS法测定其酶活并进行酶学分析。[结果]经表达分析12条不同Linker构建的融合酶与亲本酶酶活，发现用Linker a3、pS3和具有“自我剪切”能力T2A构建的融合酶在木聚糖酶和甘露聚糖酶活性都显著高于两亲本酶。融合酶XynB-a3-ManA的木聚糖酶和甘露聚糖酶酶活比亲本酶XynB和ManA分别提高了54.06%和104.40%；该融合酶在酸性环境3.0-7.0起作用，对pH3.0~8.0具有一定的耐受力。[结论]首次获得可在哺乳动物系统表达分泌的增强型双功能XynB-ManA融合酶。