粉尘螨第7类变应原(Der f 7)基因的克隆表达及免疫学特性鉴定

• 作者: 刘志刚 吉坤美 邬玉兰 郑蔓茵 闫浩
• 来源期刊: 中国寄生虫学与寄生虫病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 粉尘螨 Der f 7 变应原 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 363-366
• 分类号: R384.429
• 语种: 中文

摘要

目的 克隆和表达粉尘螨第7类变应原基因,并鉴定重组蛋白的免疫原性. 方法 提取粉尘螨总RNA,根据GenBank提供的Der f 7编码区(CDS)(登录号为AY 283292)序列设计特异性引物,逆转录PCR(RT-PCR)克隆Der f 7基因.将测序正确的目的片段克隆至pET-32a表达载体,得到的重组质粒pET-32a-Der f 7在大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)中用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过镍离子亲和层析纯化目的蛋白.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测目的蛋白表达和纯化结果,蛋白质印迹(Western Blotting)分析重组蛋白的免疫原性. 结果 RT-PCR结果显示,Der f 7基因片段大小约为650 bp.测序结果表明,Der f 7基因片段与已发表的粉尘螨Der f 7基因(登录号为FJ436108)同源性为99％.SDS-PAGE结果显示,重组质粒pET32a-Der f 7在BL21(DE3)中高效表达,重组蛋白相对分子质量(Mr)约为23000.Western Blotting分析结果表明,Der f 7重组蛋白可被尘螨过敏患者血清识别. 结论 成功构建了粉尘螨第7类变应原的原核表达载体,并获得具有免疫原性的Derf7重组蛋白.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邬玉兰	深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所	36	133	6.0	8.0
2	刘志刚	深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所	324	1724	17.0	23.0
3	吉坤美	深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所	32	237	10.0	13.0
4	闫浩	深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所	13	74	5.0	8.0
5	郑蔓茵	深圳大学医学院过敏反应与免疫学研究所	4	6	1.0	2.0