H1亚型禽流感病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 刘加波 庞耀珊 罗思思 范晴 谢志勤 谢芝勋 邓显文 郭捷
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: H1亚型AIV SYBR Green Ⅰ 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 29-34
• 页数: 6页
• 分类号: Q789|S852.659.5
• 字数: 3449字
• 语种: 中文

摘要

本研究旨在建立一种检测H1亚型禽流感病毒(AIV)的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法.根据对GenBank中H1亚型AIV HA基因序列的分析,设计针对H1亚型AIV的HA基因特异性引物,并以H1亚型AIV的cDNA为模版,构建重组阳性质粒.采用梯度稀释重组标准品阳性质粒DNA的方法,建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(real-time PCR)标准曲线.敏感性试验结果显示,扩增效率和标准误差分别为100.9％和0.011 7,熔解曲线呈单一熔解峰.在35个Ct值内该方法可检测到100个拷贝的标准品DNA；特异性试验结果显示,该方法对于其他亚型AIV和禽呼吸道病原体不能检出；重复性试验结果显示,组内变异系数小于1％.建立的Real-time PCR具有特异、敏感、快速、重复性好等优点,可用于临床上H1亚型AIV的检测.