泡桐丛枝植原体pPaWBNy-1-ORF5编码蛋白的原核表达和抗体制备

• 作者: 宋传生 林彩丽 田国忠 耿显胜 胡佳续
• 来源期刊: 植物病理学报
• 学科: 农学
• 关键词: 泡桐丛枝病 植原体 茶翅蝽 原核表达 免疫印迹
• 年，卷（期）: 2013,（5）
• 所属期刊栏目: 病原学
• 页码范围: 467-474
• 页数: 8页
• 分类号: S436.41
• 字数: 5495字
• 语种: 中文

摘要

利用含泡桐丛枝植原体质粒pPaWBNy-1的3.0kb片段的克隆为模板,PCR扩增pPaWBNy-1-ORF5的亲水性肽段编码区.目的片段连接到原核表达载体pET28a(+),重组质粒pET28a-ORF5-5转化大肠杆菌(Escherichia coli)Rosseta (DE3)感受态细胞,菌液处在对数生长期时(OD600=0.52),添加IPTG诱导5h后收集菌体,提取蛋白并进行聚丙烯酰胺凝胶电泳.用六聚组氨酸标签抗体进行Western blot检测,发现分子量约为15 kDa的含多聚组氨酸标签的目的蛋白得到表达.切胶回收融合蛋白,免疫德国大白兔以制备抗血清,间接ELISA法测定抗血清的效价约为1∶8 100.用制备的ORF5编码蛋白的抗血清进行Western blot分析,结果在带菌的介体昆虫茶翅蝽(Halyomorpha halys)中检测到大小约为17 kDa的特异蛋白条带,但在健康和感病泡桐(Paulownia sp.)及无菌茶翅蝽中均未检测到,由此推测pPaWBNy-1-ORF5蛋白与介体昆虫传播植原体有关.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	田国忠	中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所国家林业局森林保护学重点实验室	34	893	13.0	29.0
2	宋传生	中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所国家林业局森林保护学重点实验室	8	26	3.0	4.0
3	耿显胜	中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所国家林业局森林保护学重点实验室	20	35	3.0	5.0
4	胡佳续	中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所国家林业局森林保护学重点实验室	4	19	3.0	4.0