重组质粒AHA1的构建和表达及对HeLa细胞周期的影响

• 作者: 刘新光 蒋智文 郑慧玲 陈维春
• 来源期刊: 国际检验医学杂志
• 关键词: HeLa细胞 免疫印迹法 细胞周期
• 年，卷（期）: 2013,（8）
• 所属期刊栏目: 基础实验研究论著
• 页码范围: 913-915,918
• 页数: 4页
• 字数: 3227字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4130.2013.08.001

摘要

目的 构建AHA1的真核表达质粒,并在HeLa细胞中进行表达,然后检测过表达的AHA1重组蛋白对HeLa细胞周期的影响.方法 提取HeLa细胞中总RNA,逆转录成cDNA后,设计引物扩增AHA1基因的编码序列后构建到pCMV-HA真核表达载体中,转染HeLa细胞后使用HA标签抗体通过免疫印迹检测AHA1融合蛋白在细胞中的表达,最后分别使用流式细胞仪和CCK-8方法检测HeLa细胞的周期和增殖的变化.结果 pCMV-HA-AHA1重组质粒经PCR和DNA限制性内切酶酶切鉴定,最后通过DNA测序并经序列相似性比对,确定AHA1重组质粒构建成功；在HeLa细胞中转染pCMV-HA-AHA1重组质粒后,免疫印迹结果显示AHA1融合蛋白在细胞确已经实现过表达,经流式细胞仪和CCK-8方法检测发现,过表达的AHA1蛋白对HeLa细胞的周期和增殖影响不大.结论 成功构建了pCMV HA-AHA1重组质粒,并且在HeLa细胞成功过表达,且过表达的AHA1蛋白对HeLa细胞的周期和增殖影响不大.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈维春	广东医学院衰老研究所	16	51	5.0	7.0
7	郑慧玲	广东医学院衰老研究所	12	15	2.0	3.0
11	蒋智文	广东医学院衰老研究所	3	72	1.0	3.0