马Toll样受体表达水平SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR检测方法的建立

• 作者: 张宇宏 李蓓 白东义 芒来 赵一萍 黄金龙
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 马 Toll样受体 骨髓 SYBR Green Ⅰ 荧光定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2013,（2）
• 所属期刊栏目: 遗传繁育
• 页码范围: 220-227
• 页数: 8页
• 分类号: S821.2
• 字数: 4856字
• 语种: 中文

摘要

旨在建立一种检测马Toll样受体(TLRs) mRNA表达水平的SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR(Rverse Transcription-Polymerase Chain Reaction)方法.参照GenBank中马TLRs的基因序列保守区设计特异性引物,以马β肌动蛋白(β-actin) mRNA为内参,建立荧光定量RT-PCR方法.结果,扩增曲线在1×102～1×108 copies·μL-1范围内有很好的线性关系,扩增相关系数在0.990以上,扩增效率在1.0左右.熔解曲线分析表明,产物为特异单峰,无引物二聚体,具有较高的特异性和灵敏度.重复性结果表明,该方法的组内、组间变异系数均小于3.50％,重复性较好.临床样品检测结果表明,TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR6、TLR7、TLR8和TLR9在骨髓中均有表达,其中TLR4 mRNA表达水平最高,TLR9 mRNA表达水平最低.本研究建立的检测方法能够成功用于临床样品的检测,为研究马匹TLRs在mRNA水平的定量分析提供技术平台.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	白东义	内蒙古农业大学动物科学学院	24	149	5.0	12.0
2	芒来	内蒙古农业大学动物科学学院	124	775	14.0	20.0
3	张宇宏	内蒙古农业大学动物科学学院	12	94	6.0	9.0
4	赵一萍	内蒙古农业大学动物科学学院	32	144	9.0	11.0
5	李蓓	内蒙古农业大学动物科学学院	17	90	6.0	9.0
6	黄金龙	内蒙古农业大学动物科学学院	8	43	4.0	6.0