hsa-miR-26b沉默载体的构建及验证

• 作者: 史春梅 季晨博 宋桂仙 庞玲霞 徐广峰 杨蕾 赵亚萍 郭锡熔 陈玲
• 来源期刊: 临床检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: hsa-miR-26b 海绵体载体 双荧光素报告系统 人脂肪细胞
• 年，卷（期）: 2013,（7）
• 所属期刊栏目: 基础实验诊断研究
• 页码范围: 503-506
• 页数: 4页
• 分类号: R394
• 字数: 3515字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建hsa-miR-26b沉默载体,与其靶基因PTEN共转染HEK-293T细胞验证其沉默效果.方法 用miRNA海绵体技术设计并合成与hsa-miR-26b成熟序列反向互补的3个重复序列的双链DNA,将短发卡状RNA(shRNA)克隆入LV3-GFP-Puro载体,与靶基因PTEN共转染HEK-293T细胞,于24 h后收集细胞RNA,用real-time PCR检测hsa-miR-26b表达水平,同时用双荧光素报告系统检测其对靶基因的作用.结果 成功构建了有效的hsa-miR-26b沉默载体,经测序验证与设计序列一致；real-time PCR验证hsa-miR-26b表达水平降低了75％；双荧光素报告系统验证其对靶基因无抑制作用(P＞0.05).结论 成功构建hsa-miR-26b沉默载体,并验证其对靶基因PTEN无抑制作用.