重组广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(AcCystatin)的理化性质研究

• 作者: 吕志跃 吴忠道 姬鹏宇 朱钥 李宝钏 李舒婷 祝程诚 赵子然
• 来源期刊: 热带医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: AcCystatin 广州管圆线虫 理化性质
• 年，卷（期）: 2013,（6）
• 所属期刊栏目: 硕博专栏论著
• 页码范围: 669-673,封4
• 分类号: R383.1
• 语种: 中文

摘要

目的 研究重组广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(AcCystatin)的理化性质及其生物学功能.方法 原核表达质粒pGEX-4T-1-AcCystatin经诱导表达、纯化酶切后获得纯化AcCystatin,采用Edman降解法N-端氨基酸测序进行重组蛋白鉴定.分别检测其紫外光谱、荧光光谱、圆二色谱和对人源Cathepsin B、Cathepsin G、Cathepsin L和Cathepsin S酶的抑制活性,分析AcCystatin理化性质.结果 重组AcCystatin蛋白经纯化、酶切后相对分子质量约为13 600,纯化效果良好,氨基酸测序结果与理论氨基酸序列完全相同.光谱学检测结果显示重组AcCystatin可形成二硫键,二级结构中α-螺旋、β-折叠和无规卷曲分别占39.57％、35.28％和25.25％.酶抑制实验结果显示AcCystatin可显著抑制Cathepsin B、Cathepsin L和Cathepsin S酶的活性,但对Cathepsin G酶活性无明显作用.结论 获得的可溶性AcCystatin重组蛋白产量大、纯度高、蛋白结构折叠正常,具有良好的生物学活性,为AcCystatin免疫调节机制的深入研究奠定了实验基础.