β-1,3-1,4葡聚糖酶基因双拷贝工程菌株的构建与发酵研究

• 作者: 吕俊楠 曹云鹤 李志民 杨雯涵 裴红蕾 陈轶群
• 来源期刊: 中国畜牧杂志
• 学科: 农学
• 关键词: β-1,3-1,4葡聚糖酶 双拷贝 毕赤酵母 发酵
• 年，卷（期）: 2013,（3）
• 所属期刊栏目: 畜牧生物技术
• 页码范围: 64-68
• 页数: 5页
• 分类号: S816.7
• 字数: 4132字
• 语种: 中文

摘要

本试验旨在研究β-1,3-1,4葡聚糖酶双拷贝基因毕赤酵母工程菌株的构建及发酵.首先,通过对质粒pGAP-glu-opt进行PCR扩增获得密码子优化的β-1,3-1,4葡聚糖酶基因glu-opt,用EcoR Ⅰ和Not Ⅰ双酶切后与毕赤酵母表达载体pPIC9K连接,获得重组质粒p9K-glu-opt.该重组质粒经SacⅠ线性化后转化毕赤酵母GS115菌株,利用不合组氨酸的MDS平板和摇瓶培养,筛选重组菌株,命名为GS115/9K-glu-opt.制备GS115/9K-glu-opt 感受态细胞,再用线性化的重组质粒pPIC-glu-opt二次转化,在含有抗生素Zeocin的YPDS平板上筛选glu-opt基因双拷贝重组菌株GS115/2xglu-opt.双拷贝重组菌在10 L发酵罐中进行高密度发酵培养及甲醇诱导表达,β-1,3-1,4葡聚糖酶最高酶活达到21 600 U/mL,约为单拷贝工程菌株X33/pPIC-glu-opt发酵活力的1.44倍；蛋白表达量达8.4 g/L,约为X33/pPIC-glu-opt的1.68倍.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹云鹤	中国农业大学动物科技学院动物营养学国家重点实验室	16	89	6.0	9.0
2	杨雯涵	中国农业大学动物科技学院动物营养学国家重点实验室	4	8	2.0	2.0
3	李志民	中国农业大学动物科技学院动物营养学国家重点实验室	8	27	2.0	5.0
4	陈轶群	中国农业大学动物科技学院动物营养学国家重点实验室	6	38	3.0	6.0
5	吕俊楠	中国农业大学动物科技学院动物营养学国家重点实验室	2	2	1.0	1.0
6	裴红蕾	中国农业大学动物科技学院动物营养学国家重点实验室	1	0	0.0	0.0